一、病原學研究及成果
1.布魯氏菌菌型分布研究
1953~2005年全區對分離出的2 126株布魯氏菌進行了菌型鑒定,其中羊種菌1 604株,牛種菌445株,豬種菌15株,犬種菌1株,非典型菌4株,粗糙型菌2株,未定種55株。生物學分型有羊種1型、2型、3型,牛種1型、3型、6型、9型,豬種1型,共4個種9個生物型。
通過毒力試驗對各菌型進行了毒力測定。毒力試驗證明,未變異的羊種菌絕大部分是強毒菌,個別地區(如哲盟科左中旗敖本臺公社)也檢出了弱毒菌。已變異的羊種菌大部分是弱毒菌,也有少數強毒菌,變異菌呈強毒較為少見。牛種未變異菌多為弱毒,強毒菌多是牛3型。
2.布魯氏菌生長特性的觀察研究
通過觀察研究發現,3種菌在pH值為6.6~7.2的培養基上生長最好,在培養基加入羊血紅蛋白溶液時,布魯氏菌培養陽性率比常用的Castanede法提高28.9%,出菌時間平均縮短2~3天。
通過布魯氏菌對數生長曲線研究試驗證明,3種菌在
此外,在病原學研究中研究人員還進行了布魯氏菌生存力及消毒試驗,病羊排菌期試驗和布氏菌噬菌體的分離等觀察與研究,取得并積累了豐富的科學數據及資料。1978年全區在哲里木盟科左中旗敖本臺鄉檢菌查源,一次由正產胎盤、流產材料中分離出羊、牛、豬、非典型布魯氏菌142株,這在國際上也是十分罕見的。
二、菌苗免疫研究及成果
1.豬型2號菌苗的研制與應用
為了尋找能夠適用于多種家畜免疫使用的菌苗,20世紀60年代初期,自治區布魯氏菌病防治研究所用農業部獸醫生物藥品監察所(現中國獸藥監察所)已經選育成功的豬型2號菌苗,對內蒙古的土種山羊進行了菌苗注射,發現其對山羊的保護率達82%,比19號菌苗高,對牛和綿羊的保護率不低于19號菌苗。
豬型2號菌苗注射方法不適宜內蒙古地區大面積推廣應用。從1967年開始,內蒙古布魯氏菌病防治研究所、內蒙古獸醫站與中國獸藥監察所協作,經過4年不懈的工作,試驗成功了口服免疫法。實驗證明,該法的免疫保護率綿羊為82.7%,山羊為78.8%,牛為71.4%,豬為70.9%,用于懷孕母畜也安全有效。1971年錫林郭勒盟正白旗用7天的時間完成了全旗416 004頭(只)畜間豬型2號菌苗口服免疫任務;烏蘭察布盟化德縣在3天內就完成了全縣167 614頭(只)牲畜的畜間口服免疫任務,免疫密度達到了99.3%。從推行這種口服免免疫法至1981年,全區共免疫成年羊1.5億只次。
1973~1975年,研究人員通過在觀察地區收集胎羔、胎盤等材料,對口服免疫法預防效果進行了檢測評估。通過對收集的29 258份胎羔、胎盤等材料進行布氏菌檢查,1973年、1974年分別只檢出5株和3株羊種布魯氏菌,1975年一株布魯氏菌也未分離出來,證明現場使用預防效果是有效的。
為了進一步改進豬型2號菌苗的免疫程序,1978年以后,通過進行羔羊、犢牛免疫期試驗,為5~6個月齡的羔羊一次口服100億菌體的豬型2號菌苗,使其在懷孕1~4胎時對強毒菌攻擊的保護率分別達到了93%、80%、73%和66%,實現了羔羊只要服苗一次即可達到終身免疫(一般羊飼養5~6年即淘汰)。
研究人員還給6~11個月齡的犢牛一次口服500億菌體的豬型2號菌苗,實施強毒菌攻擊,在對照組全部流產的情況下,服苗牛的保護力第1胎為5/7,第2胎為4/5,第3胎為3/5,證明抗布魯氏菌性流產的效果是明顯的。自1982年推廣對羔羊、犢牛實行一次免疫后,為保證幼畜免疫用苗,全區每年下發1500萬頭(只)份菌苗,提高了預防效果。
2.S105菌苗菌株的選育
為尋找更加安全有效的免疫菌苗,內蒙古地方病防治研究所與北京生物制品研究所合作,應用硫酸二乙酯(DES)化學劑處理豬型2號菌苗菌株,減毒誘變育種,選育出了S105菌株,經用小白鼠、豚鼠、羊和豬做試驗,證明該菌株的毒力較豬型2號菌苗菌株低,而且穩定性、免疫源性不低于豬型2號菌苗,給孕羊注射不會引起流產,安全有效。
3.M111菌苗菌株的選育
為區別人工免疫與自然感染的畜群,內蒙古地方病防治研究所與內蒙古獸醫工作站聯合研究培育出無凝集源性菌苗M111,它是由布氏菌粗糙型菌中選出的菌株,經過誘變減毒,免疫后不產生光滑型(S)抗體(自然界中布氏菌大都是光滑型菌,產生光滑型抗體),已進行了安全試驗、劑量試驗、大面積的免疫應用試驗。
4.提取特異性布魯氏菌免疫核糖核酸(IRNA)
內蒙古地方病防治研究所于1979年成功地提取出特異性布魯氏菌的免疫核糖核酸(IRNA),并通過動物試驗證明提取出的免疫核糖核酸(IRNA)確實具有活性和免疫信息,治療慢性布魯氏菌病有一定效果。
三、實驗診斷新技術試驗研究
1979年內蒙古地方病防治研究所成功地提取了辣根過氧化物酶,并用其分別對256例臨床已經確診的布魯氏菌病患者和170名疑似布魯氏菌病患者進行了酶聯免疫吸附試驗檢查,結果陽性率分別為93%和61.2%,說明應用酶聯免疫吸附試驗檢查布魯氏菌病有較高的特異性和敏感性。
內蒙古地方病防治研究所還應用葡萄球菌A蛋白(SPA)代替抗人球蛋白做抗體檢查試驗,在為587名布魯氏菌病患者應用葡萄球菌A蛋白(SPA)做抗體檢查后發現,兩種方法總符合率基本一致,說明葡萄球菌A蛋白(SPA)完全可以代替抗人球蛋白做抗體檢查。而葡萄球菌A蛋白(SPA)制備方法簡單,價格低廉,使用方便,易于推廣,并能縮短檢查所需的時間。
四、發病機理研究及成果
多年來,全區的地方病防治和科研人員應用細菌學、血清學,免疫學等方法,對布魯氏菌病的發病機理進行了深入的探討和研究。
1.體液免疫在發病機理中的作用
研究結果顯示,急性期和慢性期布魯氏菌病患者總補體(CH50)的含量和補體3(C3)的含量較正常人低,血清溶菌酶含量變化曲線與檢出菌結果一致。這說明,機體帶菌時血清溶菌酶活性升高,疾病處于恢復階段時溶菌酶下降。也就是說,溶菌酶的變化,從某種意義上講,是機體疾病狀態及變化的一種反映。
通過測定免疫球蛋白的水平,發現特異性抗布氏菌IgG、IgM、和IgA都具有凝集活性,其中IgM型抗體首先出現,接著出現的是IgM型抗體,IgG型抗體出現較晚,它和血清總凝集活性下降相一致。
通過觀察血清殺菌力,證實了實驗性豚鼠布魯氏菌病陽性血清有明顯的抑菌作用。
2.細胞免疫在發病機理中的地位
以下試驗研究顯示:細胞免疫在布魯氏病發病過程中起著重要的作用。
通過觀察研究發現,急慢性期布魯氏菌病患者,淋巴細胞轉化率較正常人低,E玫瑰花形成率基本上在正常范圍,致敏的淋巴細胞和特異性轉移因子可成功地轉移給陰性受體,致敏的淋巴細胞在特異抗原刺激下可釋放移動抑制因子和有絲分裂因子。
實驗動物和布魯氏菌病患者免疫機體狀態研究顯示,布魯氏菌病患者淋巴細胞的數量雖無明顯變化,但其功能顯著降低。
為了深入研究淋巴細胞亞群的變化規律和特點,研究人員用刀豆蛋白A(ConA)和花豆血凝素(PHA)激活T細胞位點不同的原理,測定了慢性期布魯氏菌病患者T細胞的亞群,證實抑制型和輔助型T細胞功能呈等比例降低。
五、病理學研究及成果
20世紀50年代后期,內蒙古醫學院對死于布魯氏菌性心臟病和布魯氏菌性神經系統病患者尸體進行了解剖,證實布魯氏菌病患者可發生潰瘍性疣贅性心內膜炎、心肌炎,心包炎,血管炎,腦脊髓膜炎和腦脊髓實質性改變。
20世紀70年代以后,內蒙古地方病防治研究所、內蒙古農牧學院等單位先后進行了布魯氏菌強毒菌和菌苗菌株感染豚鼠的病理形態動態觀察,豬型2號菌苗免疫牛、羊和實驗對照動物的病理改變比較,并應用過氧化物酶標記抗體,對豬型2號菌苗免疫羔羊組織內免疫球蛋白的定位及形態學觀察,以及家兔感染牛、羊、豬種布氏菌后病理改變等項工作,證實了強毒菌株和菌苗菌均能引起本質上相同的病理變化,但在病變程度上有差異。豚鼠的病變是經過變質、滲出、增生和硬化這樣一個過程而告終,這與臨床經過一致;豬型2號菌苗免疫牛羊,機體可產生良好的組織學反應,不引起嚴重的病理損傷,所產生的抗體主要是IgG型;三種菌對家兔所致病理損傷以豬種菌最為明顯,并多有嚴重的壞死和化膿。
1978~2005年,全區布魯氏菌病防治工作者圍繞布魯氏菌病防控所進行的科學研究或實驗調查,共計有16項獲省部級以上表彰獎勵或科技進步成果獎。
一、病原學研究及成果
1.布魯氏菌菌型分布研究
1953~2005年全區對分離出的2 126株布魯氏菌進行了菌型鑒定,其中羊種菌1 604株,牛種菌445株,豬種菌15株,犬種菌1株,非典型菌4株,粗糙型菌2株,未定種55株。生物學分型有羊種1型、2型、3型,牛種1型、3型、6型、9型,豬種1型,共4個種9個生物型。
通過毒力試驗對各菌型進行了毒力測定。毒力試驗證明,未變異的羊種菌絕大部分是強毒菌,個別地區(如哲盟科左中旗敖本臺公社)也檢出了弱毒菌。已變異的羊種菌大部分是弱毒菌,也有少數強毒菌,變異菌呈強毒較為少見。牛種未變異菌多為弱毒,強毒菌多是牛3型。
2.布魯氏菌生長特性的觀察研究
通過觀察研究發現,3種菌在pH值為6.6~7.2的培養基上生長最好,在培養基加入羊血紅蛋白溶液時,布魯氏菌培養陽性率比常用的Castanede法提高28.9%,出菌時間平均縮短2~3天。
通過布魯氏菌對數生長曲線研究試驗證明,3種菌在
此外,在病原學研究中研究人員還進行了布魯氏菌生存力及消毒試驗,病羊排菌期試驗和布氏菌噬菌體的分離等觀察與研究,取得并積累了豐富的科學數據及資料。1978年全區在哲里木盟科左中旗敖本臺鄉檢菌查源,一次由正產胎盤、流產材料中分離出羊、牛、豬、非典型布魯氏菌142株,這在國際上也是十分罕見的。
二、菌苗免疫研究及成果
1.豬型2號菌苗的研制與應用
為了尋找能夠適用于多種家畜免疫使用的菌苗,20世紀60年代初期,自治區布魯氏菌病防治研究所用農業部獸醫生物藥品監察所(現中國獸藥監察所)已經選育成功的豬型2號菌苗,對內蒙古的土種山羊進行了菌苗注射,發現其對山羊的保護率達82%,比19號菌苗高,對牛和綿羊的保護率不低于19號菌苗。
豬型2號菌苗注射方法不適宜內蒙古地區大面積推廣應用。從1967年開始,內蒙古布魯氏菌病防治研究所、內蒙古獸醫站與中國獸藥監察所協作,經過4年不懈的工作,試驗成功了口服免疫法。實驗證明,該法的免疫保護率綿羊為82.7%,山羊為78.8%,牛為71.4%,豬為70.9%,用于懷孕母畜也安全有效。1971年錫林郭勒盟正白旗用7天的時間完成了全旗416 004頭(只)畜間豬型2號菌苗口服免疫任務;烏蘭察布盟化德縣在3天內就完成了全縣167 614頭(只)牲畜的畜間口服免疫任務,免疫密度達到了99.3%。從推行這種口服免免疫法至1981年,全區共免疫成年羊1.5億只次。
1973~1975年,研究人員通過在觀察地區收集胎羔、胎盤等材料,對口服免疫法預防效果進行了檢測評估。通過對收集的29 258份胎羔、胎盤等材料進行布氏菌檢查,1973年、1974年分別只檢出5株和3株羊種布魯氏菌,1975年一株布魯氏菌也未分離出來,證明現場使用預防效果是有效的。
為了進一步改進豬型2號菌苗的免疫程序,1978年以后,通過進行羔羊、犢牛免疫期試驗,為5~6個月齡的羔羊一次口服100億菌體的豬型2號菌苗,使其在懷孕1~4胎時對強毒菌攻擊的保護率分別達到了93%、80%、73%和66%,實現了羔羊只要服苗一次即可達到終身免疫(一般羊飼養5~6年即淘汰)。
研究人員還給6~11個月齡的犢牛一次口服500億菌體的豬型2號菌苗,實施強毒菌攻擊,在對照組全部流產的情況下,服苗牛的保護力第1胎為5/7,第2胎為4/5,第3胎為3/5,證明抗布魯氏菌性流產的效果是明顯的。自1982年推廣對羔羊、犢牛實行一次免疫后,為保證幼畜免疫用苗,全區每年下發1500萬頭(只)份菌苗,提高了預防效果。
2.S105菌苗菌株的選育
為尋找更加安全有效的免疫菌苗,內蒙古地方病防治研究所與北京生物制品研究所合作,應用硫酸二乙酯(DES)化學劑處理豬型2號菌苗菌株,減毒誘變育種,選育出了S105菌株,經用小白鼠、豚鼠、羊和豬做試驗,證明該菌株的毒力較豬型2號菌苗菌株低,而且穩定性、免疫源性不低于豬型2號菌苗,給孕羊注射不會引起流產,安全有效。
3.M111菌苗菌株的選育
為區別人工免疫與自然感染的畜群,內蒙古地方病防治研究所與內蒙古獸醫工作站聯合研究培育出無凝集源性菌苗M111,它是由布氏菌粗糙型菌中選出的菌株,經過誘變減毒,免疫后不產生光滑型(S)抗體(自然界中布氏菌大都是光滑型菌,產生光滑型抗體),已進行了安全試驗、劑量試驗、大面積的免疫應用試驗。
4.提取特異性布魯氏菌免疫核糖核酸(IRNA)
內蒙古地方病防治研究所于1979年成功地提取出特異性布魯氏菌的免疫核糖核酸(IRNA),并通過動物試驗證明提取出的免疫核糖核酸(IRNA)確實具有活性和免疫信息,治療慢性布魯氏菌病有一定效果。
三、實驗診斷新技術試驗研究
1979年內蒙古地方病防治研究所成功地提取了辣根過氧化物酶,并用其分別對256例臨床已經確診的布魯氏菌病患者和170名疑似布魯氏菌病患者進行了酶聯免疫吸附試驗檢查,結果陽性率分別為93%和61.2%,說明應用酶聯免疫吸附試驗檢查布魯氏菌病有較高的特異性和敏感性。
內蒙古地方病防治研究所還應用葡萄球菌A蛋白(SPA)代替抗人球蛋白做抗體檢查試驗,在為587名布魯氏菌病患者應用葡萄球菌A蛋白(SPA)做抗體檢查后發現,兩種方法總符合率基本一致,說明葡萄球菌A蛋白(SPA)完全可以代替抗人球蛋白做抗體檢查。而葡萄球菌A蛋白(SPA)制備方法簡單,價格低廉,使用方便,易于推廣,并能縮短檢查所需的時間。
四、發病機理研究及成果
多年來,全區的地方病防治和科研人員應用細菌學、血清學,免疫學等方法,對布魯氏菌病的發病機理進行了深入的探討和研究。
1.體液免疫在發病機理中的作用
研究結果顯示,急性期和慢性期布魯氏菌病患者總補體(CH50)的含量和補體3(C3)的含量較正常人低,血清溶菌酶含量變化曲線與檢出菌結果一致。這說明,機體帶菌時血清溶菌酶活性升高,疾病處于恢復階段時溶菌酶下降。也就是說,溶菌酶的變化,從某種意義上講,是機體疾病狀態及變化的一種反映。
通過測定免疫球蛋白的水平,發現特異性抗布氏菌IgG、IgM、和IgA都具有凝集活性,其中IgM型抗體首先出現,接著出現的是IgM型抗體,IgG型抗體出現較晚,它和血清總凝集活性下降相一致。
通過觀察血清殺菌力,證實了實驗性豚鼠布魯氏菌病陽性血清有明顯的抑菌作用。
2.細胞免疫在發病機理中的地位
以下試驗研究顯示:細胞免疫在布魯氏病發病過程中起著重要的作用。
通過觀察研究發現,急慢性期布魯氏菌病患者,淋巴細胞轉化率較正常人低,E玫瑰花形成率基本上在正常范圍,致敏的淋巴細胞和特異性轉移因子可成功地轉移給陰性受體,致敏的淋巴細胞在特異抗原刺激下可釋放移動抑制因子和有絲分裂因子。
實驗動物和布魯氏菌病患者免疫機體狀態研究顯示,布魯氏菌病患者淋巴細胞的數量雖無明顯變化,但其功能顯著降低。
為了深入研究淋巴細胞亞群的變化規律和特點,研究人員用刀豆蛋白A(ConA)和花豆血凝素(PHA)激活T細胞位點不同的原理,測定了慢性期布魯氏菌病患者T細胞的亞群,證實抑制型和輔助型T細胞功能呈等比例降低。
五、病理學研究及成果
20世紀50年代后期,內蒙古醫學院對死于布魯氏菌性心臟病和布魯氏菌性神經系統病患者尸體進行了解剖,證實布魯氏菌病患者可發生潰瘍性疣贅性心內膜炎、心肌炎,心包炎,血管炎,腦脊髓膜炎和腦脊髓實質性改變。
20世紀70年代以后,內蒙古地方病防治研究所、內蒙古農牧學院等單位先后進行了布魯氏菌強毒菌和菌苗菌株感染豚鼠的病理形態動態觀察,豬型2號菌苗免疫牛、羊和實驗對照動物的病理改變比較,并應用過氧化物酶標記抗體,對豬型2號菌苗免疫羔羊組織內免疫球蛋白的定位及形態學觀察,以及家兔感染牛、羊、豬種布氏菌后病理改變等項工作,證實了強毒菌株和菌苗菌均能引起本質上相同的病理變化,但在病變程度上有差異。豚鼠的病變是經過變質、滲出、增生和硬化這樣一個過程而告終,這與臨床經過一致;豬型2號菌苗免疫牛羊,機體可產生良好的組織學反應,不引起嚴重的病理損傷,所產生的抗體主要是IgG型;三種菌對家兔所致病理損傷以豬種菌最為明顯,并多有嚴重的壞死和化膿。
1978~2005年,全區布魯氏菌病防治工作者圍繞布魯氏菌病防控所進行的科學研究或實驗調查,共計有16項獲省部級以上表彰獎勵或科技進步成果獎。